SHPORA.net :: PDA

[ Back ]

1) Комплемент является одним из важных факторов гуморального иммунитета, играю-

щим большую роль в защите организма от антигенов. Он был открыт в 1899 г.

француз-ским иммунологом Ж.Борде, назвавшим его «алексином». Современное

название ком-плементу дал П.Эрлих.

Комплемент представляет собой сложный комплекс белков сыворотки крови, находя-

щийся обычно в неактивном состоянии и активирующийся при образовании комплекса

антигена с антителом или при агрегации антигена, т.е. в начале иммунного

процесса. В состав комплемента входят 20 взаимодействующих между собой белков, 9

из которых являются основными компонентами комплемента, их обозначают как CI,

C2, СЗ...С9. Важную роль играют также факторы В, D и Р (пропердин). Белки

комплемента относятся к глобулинам и различаются по ряду физико-химических

свойств.

Функции комплемента многообразны: а) он участвует в лизисе микробных и других

кле-ток (цитотоксическое действие); б) обладает хемотаксической активностью; в)

участвует в анафилаксии; г) участвует в фагоцитозе. Следовательно, комплемент

является компо-нентом многих иммунолитических реакций, направленных на

освобождение организма от микробов и других чужеродных клеток и антигенов

(например, опухолевых клеток, трансплантата).

Механизм активации комплемента очень сложен и представляет собой каскад

фермента-тивных протеолитических реакций. В результате образуется активный

цитотоксический комплекс, разрушающий стенку бактерии и других клеток.

Существуют 3 пути активации комплемента: классический и альтернативный и

лектиновый.

По классическому пути комплемент активируется комплексом антиген—антитело.

Для этого достаточно участия в связывании антигена одной молекулы IgM или двух

мо-лекул IgG. Процесс начинается с присоединения к комплексу антиген—антитело

компо-нента С1, который распадается на субъединицы Clq, Clr и СIs. Далее в

реакции участвуют последовательно активированные «ранние» компоненты

комплемента: С4, С2 , СЗ. Эта реакция имеет характер усиливающегося каскада:

одна молекула предыдущего компо-нента активирует несколько молекул последующего.

«Ранний» компонент комплемента СЗ активирует компонент С5, который обладает

свойством прикрепляться к мембране клетки. На компоненте С5 путем

последовательного присоединения «поздних» компо-нентов С6, С7, С8 и С9

образуется литический или мембраноатакующий комплекс, кото-рый нарушает

целостность мембраны (образует в ней дыру), в результате чего клетка по-

гибает.(осмотический лизис)

Альтернативный путь активации комплемента происходит без участия антител. Этот

путь характерен для защиты от грамм-отрицательных микробов. Каскадная цепная

реак-ция при альтернативном пути начинается с взаимодействия антигена (например,

полиса-харида) с протеинами В и D и пропердином (Р), затем активируется

компонент СЗ. Далее реакция идет так же, как и при классическом пути: образуется

мембраноатакующий ком-плекс.

Лектиновый путь без участия антител.Инициируется маннозосвязывающим белком сы-

воротки крови ,который после связ-я с остатками маннозы на поверхностимикроб

клеток катализирует С4,далее как классический.

В процессе активации комплемента образуются продукты протеолиза его компонентов

— субъединицы СЗа и СЗЬ, С5а и С5Ь и другие, которые обладают высокой

биологической активностью. Например, СЗа и С5а участвуют в анафилактических

реакциях, являются хемоаттрактантами, СЗЬ является опсонином и т.д.

Сложная каскадная реакция комплемента осуществляется с участием Са2* и Mg2*.

Титрование комплемента.

Для определения титра комплемента исследуемую сыворотку разводят и добавляют ге-

молитическую систему (смесь равных объемов эритроцитов барана и гемолитической

сы-воротки). Пробирки инкубируют при 37ºС 30 минут, встряхивая каждые 10 минут.

Для контроля готовят разведения эритроцитов и дисиллированной воды: 0,1 мл + 2,9

мл (со-ответствует 20 % гемолизу), 0,25 мл + 2,75 мл (соответствует 50 %

гемолизу), 0,35 мл + 2,65 мл (соответствует 70 % гемолизу).Затем содержимое

пробирки центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 минут и определяют пробирку,

соответствующую 50 % гемолизу. Количество комплемента, внесенное в эту пробирку,

делят на исходное разведение и узнают, какое количество неразведенной сыворотки

дает этот феномен. Полученная ве-личина будет соответствовать 1 единице СН50.

Вычисляют, сколько таких единиц будет в 1 мл неразведенной сыворотки (схема

титрования комплемента приведена в приложении). Показатели основных гуморальных

факторов иммунитета здоровых людей приведены в таблице 7.

Определение количества пропердина.

Опыт ставится в двух пробирках. Опытная содержит испытуемую сыворотку, зимозан и

комплемент, контрольная – только испытуемую сыворотку и комплемент. Пробирки ин-

кубируют при 37ºС 60 минут. Далее в обеих пробирках по общепринятой методике

тит-рую комплемент. Титр комплемента в контрольной пробирке показывает, какое

количе-ство комплемента было в опытной пробирке до образования комплекса

пропердин-зимозан. Титрование же комплемента в опытной пробирке показывает какое

количество осталось несвязанным после образования этого комплекса. По разнице

полученных еди-ниц можно судить о количестве комплемента, связанного комплексом

пропердин-зимозан. За 1 единицу пропердина принимается его количество, которое

полностью свя-зывает весь комплемент в 1 мл сыворотки.

2)Escherichia coli? Бактерии хорошо растут на простых питательных средах: (МПБ),

(МПА). На МПБ дают обильный рост при значительном помутнении среды; осадок не-

большой, сероватого цвета, легкоразбивающийся. Образуют пристеночное кольцо,

пленка на поверхности бульона обычно отсутствует. На МПА колонии прозрачные с

серовато-голубым отливом, легко сливающиеся между собой. На среде Эндо образуют

плоские красные колонии средней величины. Красные колонии могут быть с темным

металличе-ским блеском (Е. coli) или без блеска (E.aerogenes). Большинство

бактерий группы ки-шечных палочек (БГКП) не разжижают желатина, свертывают

молоко, расщепляют пеп-тоны с образованием аминов, аммиака, сероводорода,

обладают высокой ферментативной активностью в отношении лактозы, глюкозы и

других сахаров, а также спиртов. Не обла-дают оксидазной активностью. По

способности расщеплять лактозу при температуре 37°С БГКП делят на

лактозоотрицательные и лактозоположительные кишечные палочки (ЛКП), или

колиформные, которые формируются по международным стандартам. Из группы ЛКП

выделяются фекальные кишечные палочки (ФКП), способные ферментировать лактозу

при температуре 44,5°С . К ним относится Е. coli, не растущая на цитратной

среде.

Бактериологическое исследование . Испражнения засевают на чашки со средой Эндо

для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37°С до следующего

дня, затем из части красной колонии делают мазок, окрашивают по Граму и

микроскопи-руют. По морфологии эшерихии практически не отличаются от шигелл и

сальмонелл и патогенные от непатогенных нмф. Материал (из лактозположительных)из

другой части колонии используют для постановки реакции агглютинации на стекле со

смесью ОВ-сывороток, содержащих антитела против наиболее распространенных

серогрупп энтеро-патогенных эшерихий. Обычно проверяют на агглютинабельность не

менее 10 колоний с каждой чашки. При положительном результате ставят реакцию

агглютинации с сыворот-ками 026:В6, 055:В5, О111:В4, 0124:В17 и др., после чего

делают предварительное за-ключение. Затем пересевают несколько агглютинабельных

колоний на скошенный пита-тельный агар для получения чистых культур. На 3-й день

проверяют агглютинабельность чистых культур в реакции агглютинации на стекле со

смесью ОВ-сыворотками, «+»-развернутур р-ю агглютинации с соот.сыв-ой.

Экспрсс:ПЦР(ПРЕД.ДИАГНОЗ)







3)Аллерген туберкулезный очищенный в стандартном разведении (Туберкулин)

Очищенный туберкулин в стандартном разведении представляет собой смесь

фильтратов убитых нагреванием культур микобактерий туберкулеза человеческого и

бычьего видов, осажденных трихлоруксусной кислотой, обработанных этиловым

спиртом и эфиром для наркоза

Назначение. Туберкулин предназначен для массовой туберкулинодиагностики, с

целью:

с целью отбора контингента для ревакцинации БЦЖ, а также перед первичной

вакцина-цией детей в возрасте 2 месяца и более. для диагностики туберкулеза, в

том числе для раннего выявления начальных и локальных форм туберкулеза у детей и

подростков. для определения инфицирования микобактериями туберкулеза.